Topoisomerase I 來(lái)源于牛痘病毒（vaccinia virus）， 通過(guò)基因重組方案制備純化。其能解旋DNA的超螺旋結(jié)構(gòu)， 除此外其能識(shí)別并切割雙鏈DNA末端 [5’C(T)CCTT↓]，并 且與DNA形成共價(jià)連接形成穩(wěn)定復(fù)合物。該共價(jià)復(fù)合物遇 到DNA的5’-OH基團(tuán)后，重新連接形成完整DNA鏈。因此， 使用該酶可作為DNA連接的有效工具，可用于DNA的載體 連接（TOPO克隆載體制備）、接頭連接（NGS建庫(kù)）等實(shí) 驗(yàn)。