選擇處于指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，按照常規(guī)方法收集貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞于離心管中。

1000 rpm-2000 rpm，離心 5 分鐘，收集培養(yǎng)細(xì)胞沉淀，棄上清液。

加入適量 4℃預(yù)冷的 BIOHUB 無(wú)血清細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。 （按照細(xì)胞密度和所用細(xì)胞凍存管的尺寸計(jì)算所需凍存液的量，推薦凍存密度：1x10⁶ 至 5x10⁶cells/mL。）

將細(xì)胞懸液分裝至已標(biāo)記的凍存管中，建議每管 1mL 或 1.5mL。

在 15 mL 離心管中加入 5-10 mL 平衡至室溫的wan全培養(yǎng)基。

從-80℃冰箱/液氮中取出凍存的細(xì)胞，立即放入 37℃水浴鍋或其他細(xì)胞復(fù)蘇設(shè)備中，迅速解凍。

將凍存管中的細(xì)胞懸液逐滴轉(zhuǎn)移至預(yù)先準(zhǔn)備好的含wan全培養(yǎng)基的離心管中，1000 rpm-1500 rpm，離心 5 分鐘，收集細(xì)胞沉淀，棄上清（操作時(shí)小心，切勿將細(xì)胞沉淀移去）。

加入適量平衡至室溫的wan全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，接種到事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)容器中，輕輕搖晃培養(yǎng)容器，使細(xì)胞分布均勻。

鏡檢細(xì)胞后，可根據(jù)各自研究的需要和方法進(jìn)行細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)。培養(yǎng) 5-24h 后，觀察細(xì)胞狀態(tài)，可視情況更換鮮細(xì)胞培養(yǎng)液。